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首先不要去对号入座,血常规结果可以看出异常,但是不能直接诊断白血病,需要做进一步的检查才能确诊。如果实在担心的话,可以完善下外周血细胞形态检查,看看是否有幼稚粒细胞明显增多,没有的话基本上不考虑呢,可以放心。完善外周血细胞形态如果有异常,骨髓穿刺是最后一步,不着急。有空完善佝偻病检查,看看宝宝是否是正常的。小朋友37.5以下都是正常的。腋窝痛的话,一般病毒感染的话会引起来腋窝淋巴结肿大可能会有点痛。
ELISA样本制备指南及注意事项
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定义及介绍
悬浮细胞可直接离心收集。收集的细胞用冷的PBS洗涤3次。每10
6个细胞中加入150-200μLPBS重悬(推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂;若含量很低可减少PBS的体积)并通过反复冻融或超声使细胞破碎。将提取液于2-8℃,1500×g离心10min,取上清检测。注:留取20μL样本,用于后续BCA测定。
其余方法:
对于
贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。以2百万细胞为例,在样本中加入100μL的含1%PMSF的1×PBS缓冲液,震荡混匀细胞,4℃或冰上裂解30min。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。必要时可以进行超声处理,超声步骤与组织样本相同。
对于
悬浮细胞:离心收集细胞,以2×10
6细胞为例,在样本中加入100μL的含1%PMSF的1×PBS缓冲液,震荡混匀细胞,4℃或冰上裂解30min。用手指轻弹悬浮细胞以充分裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成(5-10)×10
5细胞/管,然后再裂解。必要时可以进行超声处理,超声步骤与组织样本相同。注:1×PBS缓冲液使用前,需加入PMSF,现用现加,PMSF终浓度为1mM。打开离心机,将转速调至12000×g;将样本放入离心机,离心10min,取上清,按需要分装,于-20℃贮存。注:留取20μL样本,用于后续BCA法测定样本蛋白含量。
5.细胞培养上清或其他生物体液
收集液体后于2-8℃,1000×g离心20min,除去杂质及细胞碎片。取上清检测。注:因细胞培养基中的胎牛血清影响或其他生物体液中杂蛋白的影响,不建议进行BCA法测定样本蛋白含量。
实验细节与注意事项
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收集血液应避免产生溶血现象。红细胞破碎,释放大量的过氧化物酶,会影响ELISA检测中的辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(AP)的酶促反应,造成检测结果的不确定性。
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样品收集后若在1周内进行检测可保存于2-8℃,若不能及时检测,请按一次使用量分装,冻存于-20℃(1个月内检测),或-80℃(3个月内检测),避免反复冻融。在检测前,冷冻过的样本应缓慢地融化并离心除去冻融过程产生的沉淀物。室温混匀后使用。
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试剂盒检测范围不等同于样本中待测物的浓度范围,建议实验前通过相关文献预估样本中待测物的浓度并通过预实验确定样本的实际浓度情况。如果样品中待测物浓度过高或过低,请对样本做适当的稀释或浓缩。
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检测样本的稀释推荐多步稀释法,常规稀释检测为血清/血浆检测稀释度为2倍、20倍、200倍;细胞上清稀释度为5倍、50倍、500倍;建议实验前通过相关文献预估样本中待测物的浓度。
对于稀释倍数比较大的检测样本,参考稀释方案如下:
稀释100倍:一步稀释。取5μL样本到495μL标准品/样本稀释液内,做100倍稀释;
稀释1000倍:两步稀释。取5μL样本到95μL标准品/样本稀释液内,做20倍稀释,再取5μL 20倍稀释样本到245μL标准品/样本稀释液内,做50倍稀释,总共稀释1000倍;
稀释100000倍:三步稀释。取5μL样本到195μL标准品/样本稀释液内,做40倍稀释,再取5μL 40倍稀释样本到245μL标准品/样本稀释液内,做50倍稀释,最后取5μL 2000倍稀释样本到245μL标准品/样本稀释液内,做50倍稀释,总共稀释100000倍;
每步稀释时取液量不少于3μL,稀释倍数不超过100倍。每步稀释都需混合均匀,避免起泡。
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若所检样本不在说明书所列样本之中,建议做预实验验证其检测有效性。
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若使用化学裂解液制备组织匀浆或细胞提取液,由于引入某些化学物质会导致ELISA测值出现偏差。
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某些重组蛋白可能与试剂盒中捕获或检测抗体不匹配而出现不能检测的情况。
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对于组织匀浆、组织全蛋白、细胞提取液等蛋白提取样本,经BCA法测定样本蛋白含量后,建议进行蛋白浓度的统一化,避免因组织重量、细胞数、产物体积等因素造成的人为误差;例如,统一全部检测样本浓度为1-2mg/mL,进行后续的稀释和检测。
截至2020年12月31日,内蒙古自治区已有8家医院可以开展辅助生殖技术,其中呼和浩特有3家,只有2家可以开展试管婴儿技术。为了方便更多的姐妹选择合适的医院,我们专门整理了呼和浩特试管婴儿医院排名。
2022呼和浩特试管婴儿医院排名:序号 | 医院名称 | 能不能做试管 | 地址 |
1 | 内蒙古医科大学附属医院 | 能做 | 内蒙古呼和浩特回民区通道北街1号 |
2 | 内蒙古自治区人民医院 | 能做 | 内蒙古呼和浩特新城区昭乌达路20号 |
3 | 内蒙古自治区妇幼保健院 | 不能做 | 内蒙古呼和浩特新城区察哈尔大街北侧 |
4 | 内蒙古中医院 | 不能做 | 内蒙古自治区呼和浩特市新城区健康街11号 |
5 | 内蒙古医科大二附院 | 不能做 | 内蒙古呼和浩特市文化街营坊道 |
6 | 内蒙古第四医院 | 不能做 | 内蒙古自治区呼和浩特市新城区机场路 |
7 | 内蒙古自治区第三医院 | 不能做 | 内蒙古呼和浩特市新城区乌兰察布西路23号 |
8 | 内蒙古自治区肿瘤医院 | 不能做 | 内蒙古自治区呼和浩特市赛罕区昭乌达路42号 |
9 | 内蒙古国际蒙医医院 | 不能做 | 内蒙古自治区呼和浩特市大学东街83号 |
10 | 呼和浩特市第二医院 | 不能做 | 呼和浩特市玉泉区石羊桥南路南二环 |
11 | 联勤保障部队九六九医院 | 不能做 | 新城区爱民街111号 |
1、内蒙古医科大学附属医院。
试管婴儿成功率:35%-66%;试管婴儿费用:4-8万元。
自2008年成立以来,内蒙古医科大学附属医院就可以开展体外受精-胚胎移植技术、卵胞浆内单精子注射-胚胎移植技术、胚胎冷冻和冻融胚胎移植技术、夫精宫腔内人工授精技术、附睾/睾丸穿刺取精活检技术、精子冷冻保存技术性、门诊促排卵指导怀孕、精子常规、抗精子抗体等精子作用的检查、复发性流产的检查及治疗等服务。
2、内蒙古自治区人民医院。
试管成功率:30%-50%;试管婴儿费用:3-6万元。
2010年5月,内蒙古自治区人民医院生殖中心被批准进行人类辅助生殖技术,即试管婴儿和夫精人工授精。它拥有国际先进的辅助生殖技术和设备,为试管婴儿技术提供了基本保障。同时,还有呼吸内科、骨科、妇科、产科、医学工程等临床医学重点学科。
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